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发布日期:2019-12-23 浏览次数:136

 今天跟大家分享一篇文章:《消毒剂对锦鲤疱疹病毒和病毒性出血性败血症病毒的作用》

生石灰是水产养殖中最常用的消毒剂之一,由于其能与水快速反应,导致温度以及pH值迅速升高,是一种非常有效的消毒剂。但是,由于其腐蚀性极强,因此必须谨慎使用。大量使用生石灰会对水生动植物的生存产生影响。
 
过氧乙酸(PAA)是另一种常用的消毒剂。由于PAA的高反应活性,在使用后其浓度会迅速下降,尤其是在富含有机物的水中,因此,在计算剂量时必须考虑到水的成分和水温等条件。
 
为了寻找一种可替代的,环保和有效的消毒剂,本研究测试了一种市售的蛋白酶(Neutrase®)对锦鲤疱疹病毒(KHV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的灭活作用。为了进行比较,测试了这些病毒颗粒在不同pH值,不同过氧乙酸和生石灰浓度(通常用于消毒)条件下的稳定性。将病毒悬浮液与各种浓度的不同试剂孵育24小时,并通过病毒滴定确定病毒颗粒的滴度。此外,还检测了固体物质(石英砂)对消毒剂消毒效果的影响。

细胞培养基中KHV和VHSV的稳定性
实验结果显示两种病毒在DMEM培养基中高温条件下的稳定性大大降低。且在相同条件下,VHSV的稳定性高于KHV。

细胞培养基对CaO缓冲能力的测定
实验结果如表1所示,在超纯水中,pH值随溶液中CaO浓度的变化而变化,而在DMEM介质中,由于其较高的缓冲能力,仅在CaO浓度高于10–3 M时才会出现较大的pH值变化。因此,应在CaO浓度低于10–3 M的细胞培养基中进行灭活实验。

悬浮液中病毒颗粒的失活
实验研究了pH、PAA、生石灰和蛋白水解酶Neutrase®在不同温度下孵育24小时对KHV和VHSV感染性的影响。

结果显示:当pH值为10.5时,KHV和VHSV的滴定度至少降低了两个数量级。当pH值低至3和4.5或高达12时,均未检测到两种病毒颗粒。
当PAA浓度≤0.01 vol.-%(pH值在6.9-7.3之间)时,两种病毒的滴定度大约降低了两个数量级。
当PAA浓度≥0.1 vol.-% 时,均未检测到两种病毒颗粒。

当CaO浓度低于0.01m时,KHV的滴度没有降低。
当CaO浓度大于0.015m时,均未检测到两种病毒颗粒。

蛋白酶的处理使KHV病毒滴定度从最初的107 mU / ml降低到了104 mU / ml (3个数量级以上)。在蛋白水解活性为1 mU / ml的情况下,已经实现了VHSV的消毒(四个或更多的数量级),而8 mU / ml的Neutrase®已经能将两种病毒的滴度降低到检测极限以下。

总结:
本研究所有实验组都能够将KHV和VHSV的滴度降低到滴定的检测极限以下。尽管有必要进行进一步的研究,但这是蛋白酶用于灭活鱼类病毒的首次报道,证明了蛋白酶具有很大的消毒潜力。

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